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钙离子荧光探针Fluo-4 AM使用注意事项

发布时间2019-03-15        浏览次数:441

    钙离子荧光探针Fluo-4 AM广泛用于长波长的荧光钙指示剂。其在506NM处被吸收,可以被氩离子激光的488nm激发光激发,便于检测。=在没有同钙结合的情况下,无荧光产生。但是,在与钙结合后,荧光增强至少40倍。是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。Fluo-4 AM的荧光非常弱,其荧光不会随钙离子浓度升高而增强。Fluo-4 AM进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成Fluo-4,从而被滞留在细胞内。Fluo-4可以和钙离子结合,结合钙离子后可以产生较强的荧光,zui大激发波长为506nm,zui大发射波长为526nm。实际检测时推荐使用的激发波长为488nm左右,发射波长为525-530nm。
    钙离子荧光探针Fluo-4 AM使用注意事项:
    1、荧光染料有淬灭问题,应尽量避光保存;
    2、实验时注意个人防护,戴手套、口罩;
    3、每毫升细胞悬液中加入1 uL,则Fluo-3AM的使用终浓度为5μM/L
    4、按照说明书,计算0.1mg 的摩尔数为0.089μM ,则需加DMSO18uL,微量加样器反复吹打混匀后分装,按说明书要求避光-20度冰冻保存。
    5、荧光物质均易发生淬灭,染色后的样品宜避光保存。
    6、在使用抗淬灭封片液的情况下可以减缓淬灭,但仍宜尽量避光。
    7、需荧光显微镜或激光共聚焦显微镜。
    8、需PBS或0.9%NaCl溶液。
    9、需盖玻片与载玻片。